筛选稳定表达Cas9蛋白的细胞株构建技术原理 / 四六文摘

首先我们需要了解什么是细胞传代?细胞传代是将细胞从现有的培养物分开或分出来开始新的培养,并加入新鲜培养液来促进扩增的常用手段. 根据细胞生长方式的不同,传代方式可分为两种类型.对于悬浮细胞可采用加入等 ...

通过sgRNA引导Cas9核酸酶切割基因组目的序列导致DNA双链断裂(Double-strand breaks, DSB),同时以包含点突变的同源序列为模版,通过同源重组修复(Homology dir ...

CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) /Cas (CRISPR-associated) 是最近几年出现的 ...

Cas9介导同源重组(HDR)的基本操作和做基因敲除(KO)基本一致(Fig 1),除了需要多引入一条修复模板(repair template).顺利的情况下整套操作下来至少需要4周时间(心急吃不到热 ...

原理分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体.外源基因进入细胞后,部分能够通过细胞质进入细胞核内,根据细胞类型,至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时表达.极少数情况下,进入细胞的外 ...

基因敲除小鼠是什么?是否就是我们平日所说的实验室用的小白鼠?其实小鼠有很多种,小白鼠只是其中一种,通常普通的小白鼠多被药厂用作临床试验,而基因敲除的小鼠,则用于更尖端的生物医学研究. 基因敲除小鼠技术 ...

制作转基因小鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射.DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内,注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中,并稳定遗传给后代. 使用的Piggy ...

与小鼠相比,大鼠体型较大,其生理学特征易于研究,是多种人类疾病的重要模式动物. 大鼠是研究生理学的理想模型,研究者已经得到了大量的纯系大鼠,并且在大鼠的行为.细胞.生理.生化.药理和毒理学方面积累了大 ...

通过慢病毒系统或转座子系统将外源基因表达框稳定整合进靶细胞基因组,实现外源基因在靶细胞的长期稳定表达. 对比瞬转方法,构建过表达稳转株可避免瞬转中因转染效率导致的表达效率不一致的问题.构建好的细胞株中 ...

采用Tet-on系统进行诱导表达目的基因,虽然可以直接进行质粒瞬转,该类载体的慢病毒包装以构建相关的稳转细胞株.构建好的Tet-On系统细胞株同时表达tTS和rtTA两种转录调控因子,而目的基因的表达 ...

筛选稳定表达Cas9蛋白的细胞株构建技术原理