点突变细胞株构建技术原理 / 四六文摘

由靶向诱变和基因靶向组成的基因组编辑技术使我们能够快速,准确地修饰目标基因. CRISPR / Cas9系统在2012年的发现及其作为序列特异性核酸酶的发展带来了生物学的范式转变. 最初,将CRIS ...

基因敲入是基于基因重组原理,将外源基因插入生命体基因组中,并使其在体内表达的技术.基因敲入一般有两种形式:① 定点敲入:通过插入特定启动子位点来表达外源基因在小鼠基因组的安全位点插入一段表达蛋白质所需 ...

基因敲入大鼠是利用CRISPR/Cas9基因敲入技术,针对靶基因设计.构建相应的 gRNA质粒和donor vector,通过Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组,引入特定的突变或外源基因.比如 ...

一.试剂 1.细胞培养基及其他细胞培养所需试剂. 2.转染辅助试剂Polybrene(用水配制为6mg/ml,-20℃冻存). 3.Cas9表达慢病毒(制备方法见Cas9慢病毒包装实验). 4.嘌呤霉 ...

丙氨酸 352 到缬氨酸 (A352V) 和亮氨酸 353 到脯氨酸 (L353P) 的突变分别与经典 MWS 和 FCAS 患者密切相关,而在重叠综合征患者中则不太相关.通过ES打靶技术生成两个点突 ...

点突变与人类疾病基因是很多生命的蓝图,基因突变虽有对物种的多样性和演化有重要的作用,但同时也是很多疾病的根源.点突变就是突变类型中最常见的一种,是色盲症.镰刀状细胞贫血症.囊性纤维化以及很多肿瘤病变 ...

全球有超过50000种人类相关的遗传疾病,其中大部分是由基因组的点突变引起的.而对于罕见病而言,80%是由基因缺陷引起的,同时这些基因缺陷中点突变又占了60%.比如,我们熟悉的镰刀型红细胞贫血症就是由 ...

基因文库用途广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析.分离特定的基因片段等.文库已经越来越多地应用于研究领域,如高通量药物靶点筛选,蛋白质工程定向进化,基因疫苗.抗体改造,生物遗传 ...

cDNA文库,是指含一种生物体所有基因编码的cDNA分子的克隆群.以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cD ...

点突变细胞株构建技术原理