Cre工具鼠详细介绍

条件性基因打靶是将某个基因的修饰限定于某些特定类型的细胞或小鼠发育的某一特定阶段的一种特殊的基因打靶方法。目前条件性基因打靶主要使用来源于大肠杆菌P1噬菌体的Cre-LoxP系统，利用Cre-LoxP系统能够实现目的基因的定点敲入、敲除、重组酶介导的盒式交换等多种基因工程操作。

Cre-LoxP系统工作原理

Cre蛋白是一种存在大肠杆菌噬菌体P1的重组酶，它可以特异性识别细胞内基因或DNA上的LoxP序列并根据LoxP序列的位置和LoxP序列之间的关系，介导不同的特异性重组反应。

条件性基因敲除的基本原理利用的重组方式是：当两个LoxP位点位于一条DNA链上且方向相同Cre重组酶能有效地敲除两个LoxP位点间的序列（图A）

Cre-loxP诱导基因重组的方式

图为Cre-loxP诱导基因重组的方式，敲除（A）、翻转（B）、易位（C）

制备条件性基因敲除小鼠需要Floxed小鼠（即目的基因被LoxP序列锚定的小鼠）和Cre鼠两种小鼠。Cre小鼠即Cre重组酶在小鼠体内特定组织或细胞表达的小鼠，其Cre 基因的表达受控于一个特异性启动子，该启动子决定了Cre表达的组织或细胞类型。如果同时将 Cre基因置于配体或药物可诱导的启动子控制下, 就可同时实现在时间和空间水平上对 Cre表达的精确调控。