震惊反射实验、前脉冲抑制(PPI)实验方法及注意事项

一、 实验原理

震惊反射是哺乳动物对外界刺激自然产生的简单行为反应，也是评价动物反应性的一个敏感指标。它包括始于头部和尾巴的一些列快速运动：随着声音刺激的产生和增强，动物主要肌群出现收缩和舒张。抗焦虑的药物使这种反应减弱、幅度降低，致焦虑剂则相反。

二、PPI（前脉冲抑制）

短暂而强烈（一般大于80dB）的听觉刺激可以引起震惊反射。在强的震惊反射刺激出现之前20~500ms内对实验动物施加一个本身不能引起震惊反射的声音刺激，可以将震惊的幅度减小80%。这种在强烈的震惊反射刺激出现前的一段时间内出现的若感觉刺激对震惊反射的抑制作用就叫做PPI。

三、注意事项

（1）PPI测试通常使用听觉刺激模式，通常采用爆破白噪音，常用刺激序列如下：每一轮刺激刚开始时让受试对象适应一定强度的背景噪音，且持续在整个实验过程中。

（2）首先给予仅有强刺激的小实验，然后给出弱刺激与强刺激为不同时间间隔的一系列小实验，小实验顺序以随机方式给出，每两个小实验之间的时间间隔为8~30s或更长（通常为15~20s），以便后面的刺激是作为新奇刺激出现的，避免了前面刺激产生的不应期对后面刺激的影响，而且随机变化的实验间隔时间较固定间隔更少出现惊跳反射的适应性。

（3）为保证声音刺激和实验数据的准确性，设备应配备标准仪器，在每次实验前用标准仪器对设备进行校准。

震惊反射实验系统，型号:XR-XZ208,上海欣软

四、实验方法流程

Spontaneous Nicotine Withdrawal Potentiates the Effects of Stress in Rats

（1）流程：

分为两个独立的阶段（session）

1、 大鼠置于震惊笼，在昏暗条件下安静地适应5min，

2、 然后大鼠实施30次震惊刺激，90、95和105dB分别10次，平均刺激间隔时间30s，伪随机顺序（pseudorandom），黑暗环境，为**阶段震惊实验。

3、 随后大鼠被从实验笼中取出再置于饲养笼中，也是暗环境安静适应5min或15min。

4、 然后大鼠重新放入震惊笼中，准备测试阶段的实验

5、适应阶段的实验与测试阶段完全一致，除了一个是在暗环境下，一个是在明亮环境下

（2）测试步骤：

第一步：输入输出测试(input/output test)参数设置

适应时间2 min，此阶段设置为14个trails。背景噪音white noise, 65 dB，全程打开。每个trail之间的间隔在10-30 s之间随机变化。无前脉冲刺激，震惊刺激设置为white noise, 65-130 dB渐变，渐变阶梯5 dB;刺激持续时间20 ms。

第二步：短期习惯性测试(short-term habituation test)参数设置

背景噪音white noise, 65 dB，全程打开。适应时间2 min。此阶段设置为30个trails。每个trail之间的间隔在10-30 s之间随机变化。无前脉冲刺激，震惊刺激设置为white noise, 105 dB;刺激持续时间20 ms。

第三步：前脉冲抑制测试((PPI test)实验程序设置:

在实验阶段背景噪音(white noise, 65 dB)全程打开，分为适应期、Block I和BlockII三个阶段。适应期持续时间2 min。Block I设置为20个trails，每个trail无前脉冲刺激; 震惊刺激设置为white noise, 105 dB:刺激持续时间20 ms:Trail之间的间隔在10-30 s之间随机变化。Block II设置为70个trails;每个trail之间的间隔在10-30 s之间随机变化。Block II中的刺激类型分为7种，具体组合方式见表1。每种刺激类型在70次trail中出现10次，出现顺序随机。前脉冲刺激设置为0,68(+3), 71(+6）, 74(+9), 77(+12), 80(+15) dB, white noise,持续时间10 ms。Prepulse/startle stimulus delay设置为60 ms。震惊设置为white noise, 105 dB，刺激持续时间20 ms。