【干货】细胞株构建流程 / 四六文摘

载体系统借助真核基因表达调控的理论,可将较强的顺式作用元件集中到一个载体中,使其方便高效地表达外源基因.目前,已经构建了许多真核表达载体,它们包含适当的顺式作用元件和选择标记.顺式作用元件主要有启动子 ...

叶酸系由蝶啶.对氨基苯甲酸及谷氨酸的残基组成的水溶性B族维生素,为机体细胞生长和繁殖必须物质.存在于肝.肾.酵母及绿叶菜蔬如豆类.菠菜.番茄.胡萝卜等内,现已能人工合成.叶酸经二氢叶酸还原酶及维生素B ...

稳定细胞株广泛用于许多重要的应用,包括生物制品(如重组蛋白和单克隆抗体)生产.药物筛选和基因功能研究.开发稳定细胞株的过程通常始于将所需的质粒转染至选定的宿主细胞,一般是 CHO 或 HEK 293 ...

如果选择的方法不对,或者细胞株不对,不同的细胞株做基因敲除细胞系的改造会有什么变化呢?筛选细胞是基因敲除细胞成败的重要环节!如果没有正确的方法那么基因敲除的细胞株工作就不能顺利的进行,首先要知道影响基 ...

构建方bai法:先把质粒整合到染色体上后,用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系,就行成了稳定表达的细胞株. 细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群.细胞株的特殊性质 ...

LentiCRISPRv2-GOI过表达载体构建利用同源重组的方法构建LentiCRISPRv2-GOI过表达载体,采用双酶切的方式获得线性化载体,根据同源重组设计目的片段的引物.目的片段的获得分为 ...

Puro 抗性浓度摸索实验将细胞如下图1稀释.给药7天后,弃培养液,用台盼蓝染色2 min,显微镜下观察细胞存活情况.确定细胞多克隆细胞筛选和单克隆细胞筛选浓度. 图1 抗性浓度摸索单克隆形成验证 ...

细胞的稳定转染稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上,使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制.对细胞进行稳定转染最终可筛选得到稳定细胞株,稳定细胞株在重组蛋白/抗体生产.基因编辑.功能研 ...

细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系获得的具有特殊性质的细胞.因此,欲构建细胞株,首先需获得稳定的细胞系.构建流程如下: 1. 细胞培养(原核:大肠杆菌,真核:CHO细胞) 2. ...

当基因敲除会导致小鼠死亡时,需要条件敲除,才能获得成体小鼠用于研究.条件敲除一般使用Cre-loxp系统,其方法是在基因的关键区域的两侧,插入loxp.loxp小鼠制备好后,与Cre小鼠杂交,获得lo ...

重组质粒构建流程 1.基因的获得: shRNA寡核苷酸序列的设计和合成(将正确序列克隆入载体中,退火形成双链,PCR扩增) 2.回收回收试剂盒 3．连接 4. 转化 5．抽提质粒(碱裂解法提取质粒D ...

【干货】细胞株构建流程