Vkorc1基因敲除小鼠表型研究

在2-3号外显子上下游插入loxP位点，可通过与特异性Cre重组删除loxP间的序列，只残留loxP位点在基因座中。

图2. Vkorc1基因敲除小鼠打靶策略

当与CMV-Cre小鼠（广泛性Cre工具鼠,，介导基因全身性敲除）交配时，Vkorc1-/-小鼠以预期的孟德尔比率出生，但腹腔内出血2-5天内死亡；出生的纯合子小鼠无法存活到2周。

Vkorc1fl/fl小鼠与OC-Cre小鼠一起繁殖，仅在成骨细胞中失活Vkorc1基因；与Vkorc1-/-小鼠不同，Vkorc1fl/fl；OC-Cre小鼠是有活力的，没有出现任何明显的止血缺陷。血清中不同形式的骨钙素（OCN）的测定显示，在Vkorc1fl/fl;OC-Cre小鼠中，GLA-OCN的循环水平下降了约40%，而GLU-OCN的循环水平上升了约10倍。在相同的动物中，总OCN的循环水平不受影响。又因小鼠是食粪动物，当防止食粪症时，Vkorc1fl/fl;OC-Cre小鼠的循环GLA-OCN水平进一步降低；通过在培养基中添加大量（微摩尔）VK1可以挽救Vkorc1-/-成骨细胞中OCN γ-羧化缺陷。

这些结果表明，虽然VKORC1是成骨细胞中OCN γ-羧化所必需的，但它的缺失可以通过外源性高浓度VK1来补偿。

图3. Vkorc1fl/fl;OC-Cre小鼠中OCN γ-羧化的有效降低

根据这一结果，注射大剂量的VK1纠正了缺乏功能性VKORC1的小鼠或人或用VKORC1抑制剂华法林治疗的大鼠的出血缺陷。

VKORC1基因突变导致普遍的维生素K依赖性凝血因子缺乏和华法林抵抗。药物遗传学研究表明，VKORC1基因中的单核苷酸多态性 （SNP） 与华法林剂量要求之间存在很强的关联。筛选影响华法林剂量的VKORC1多态性可能有助于在口服抗凝剂治疗开始时调整剂量，以降低血栓形成和出血风险。